一、实验原理真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都能用来制备基因组DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,因此,制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基*)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质,得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA(乙二胺四乙酸二钠)存在下保持很高的活性。在...
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一、实验原理真核生物的一切有核细胞(包括培养细胞)都能用来制备基因组DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内,因此,制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离,又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS(十二烷基*)和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质,再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质,得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA(乙二胺四乙酸二钠)存在下保持很高的活性。在...
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一、实验原理体外连接的重组DNA分子导入合适的宿主细胞中才能大量的进行复制、增殖和表达。研究发现,用含Ca2+的溶液处理大肠杆菌细胞会易于吸收外源DNA。大肠杆菌吸收外源DNA的过程被称为转化。细菌处于容易吸收外源DNA的状态称为感受态。用理化方法可以诱导细胞进入感受态,如电转化法、CaCL2法。CaCL2法是目前实验室常用的制备感受态细胞的方法,其原理是使细菌处于0°C、CaCl2低渗溶液中,细胞膨胀成球形,细胞膜的通透性发生改变,外源DNA附着于细胞膜表面,经42°C短时...
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31.细胞生长的环境要求有一定湿度,必须加水!我的小经验是:1、双蒸水装在5L瓶中,2、高温灭菌,3、移进细胞培养实验室,在紫外照射下冷却,4、6小时后,在加入培养箱中使用。如果发现托盘中的说有白色漂浮物存在是,尽量吸干!(此物考虑是霉菌污染);还有如果有条件,就是定期75%酒精大清洁!我一般2个月清洁一次!(包括细胞培养实验室)这样在无菌操作下,基本保证你免除污染!!32.培养箱内不加水是不正规的,因为细胞生长的环境要求有一定湿度。我们培养细胞不仅经常保持有水,而且培养液中...
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21.看来你要大动干戈了。首先考虑培养基的问题。可以单独放置一瓶培养基到其他的培养箱里培养24小时看看是不是培养基污染。不过建议还是全部扔掉重新配置比较好。其次考虑培养箱和培养室的问题。基本上应该每一个月将培养箱*消毒一次的。首先用75%酒精擦洗,一般的培养箱都是可以拆卸的,将能拆卸的部分拆开擦洗后放到烤箱里烘烤(180度5个小时)。剩下的培养箱里用戊二醛擦洗后用紫外灯反复照射。然后在要用培养箱培养室之前再用紫外灯照射消毒2小时。你的照片里显示的应该是细菌污染,咳比较好对付。...
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11.我建议1先把培养箱*消毒.具体方法也是用75%的酒精好好清洗培养箱.2,操作时严格按照无菌操作的原则3我认为双抗的更换问题倒是不大,除非你正在使用的是污染的抗生素.4尽量减少观看细胞的次数及时间.12.我们实验室清洁培养箱的方法:用洗衣粉或洗洁精洗一遍——清水冲净——84消毒液洗——清水冲净——75%酒精擦洗一遍13.这是我们实验室常规的培养箱消毒方法(一般一个月一次),希望对你会有用14.首先把培养箱里的东西全部取出,放尽培养箱里的三蒸水;反复用三蒸水冲洗培养箱,然后...
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1.培养箱消毒:先用纯水擦洗,再用95的酒精擦洗,再照紫外就可以拉!注意周围环境的清洁就不会那么容易污染的拉!2.我的经验是在补充水时把水加热一下,达到培养箱的温度。3.这么早就养细胞了,我们这里一般是用70%的乙醇擦洗,然后再用0.1%的新洁尔灭擦洗,不放心的话再用高锰酸钾加甲醛1:1比例熏一遍。注意要是熏的话千万注意混合之后马上离开,然后密闭细胞培养室,味道很刺激的。在养细胞前消毒,否则,确实没地方放细胞。4.我们的方法比较简单,先用75%酒精擦拭内壁,通风10分钟,紫外...
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培养箱是培养微生物的主要设备,可用于细菌、细胞的培养繁殖。其原理是应用人工的方法在培养箱内造成微生物和细胞、细菌生长繁殖的人工环境,如控制一定的温度、湿度、气体等。目前使用的培养箱主要分为四种:直接电热式培养箱、隔水电热式培养箱、生化培养箱和二氧化碳培养箱。(一)电热式和隔水式培养箱电热式和隔水式培养箱的外壳通常用石棉板或铁皮喷漆制成,隔水式培养箱内层为紫铜皮制的贮水夹层,电热式培养箱的夹层是用石棉或玻璃棉等绝热材料制成,以增强保温效果,培养箱顶部设有温度计,用温度控制器自动...
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1、使用方法1.1把电源开关拨至“l”处,此时电源指示灯亮,控温仪上有数字显示;1.2温度设定a.当所需加熟温度与设定温度相同时不无原则设定,反之则需重新设定。先按控温仪的功能键“SET”进入温度设定状态,SV设定显示一闪一闪,再按移位键“◢”配合加键“△”或减键“”设定结束需按功能键“SET”确认。b.如无需设定37~C,原设定26.5~C,先按功能键“SET”,再按移位键“◢”,将光标移至显示器十位数字上,然后按加“△”,使十位数字从“2”升至为“3”,十位数设定后,移动...
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