核酸品质PC 抽提
PC 抽提是去除氨基酸的一个十分管用的手眼。苯酚能使氨基酸改变性别,改变性别后的氨基酸从水相中被析出,处于苯酚中还是苯酚/水相之间。
PC 抽提的关键是,一要混匀*,二要用量足够。*混匀,能力保证苯酚与氨基酸的充分接触,使氨基酸改变性别。人们老是担心混匀的猛烈程度是否会对核酸,特别是基因组DNA 导致毁伤,其实大可不需要这么谨慎。猛烈的混匀操作,是会对局部打断大分子的基因组DNA ,但该毁伤效用不会猛烈到DNA 成为10kb 以内的小断片。恒温培养箱
手猛烈忽悠混匀后,基因组DNA 的断片,大多会大于20kb,这个体积,除开一点尤其的要求外,对PCR 和酶切,都是适合使用的。假如要求的断片很大,如构建文库用,则不可以运用猛烈的混匀办法,而只能往返柔和颠倒混匀―此时的关键是:裂解液的比例要足够大,生化培养箱使整体体系不要太粘稠。
用量要足够,是由于苯酚去除氨基酸是有一定的达到zui高限度度的。超过了该达到zui高限度度,裂解整体体系中的氨基酸不会被一次去除,务必靠多次抽提,方可*去除。额外,整体体系太粘稠的害处是,氨基酸难于*去除,以及DNA 会断开得更利害,培养箱 所以要注意裂解液与样品的比例。