细胞培养实验室如何构建无菌操作环境

一、细胞培养及其实验室说明

 组织培养是在体外模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使从体内取出的组织生存、生长繁殖和传代，并维持原有的结构和功能特性。

 所谓细胞培养是指细胞包括单个细胞在体外条件的生长。

 组织细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作，避免微生物及其他有害因素的影响。目前，超净工作台的广泛使用，很大程度上方便了组织细胞培养工作，并使一些常规实验室有可能用于进行细胞培养。

细胞培养实验室应能进行六方面的工作：无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒灭菌处理、储藏。

二、细胞培养实验室无菌操作环境的构建

1、无菌操作室

无菌操作区只限于细胞培养及其他无菌操作的区域，能与外界隔离，不能穿行或受其他干扰。

理想的无菌操作室应划为三部分：

a) 更衣室—―供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。

b) 缓冲间—―位于更衣间与操作间之间，目的是为了保证操作间的无菌环境，同时可放置恒温培养箱及某些必需的小型仪器。

c) 无菌操作间—―于无菌操作、细胞培养。其大小要适当，且其顶部不宜过高(不超过2.5m)以保证紫外线的有效灭菌效果;墙壁光滑*以便清洁和消毒。

工作台安置不应靠墙壁，台面要光滑压塑作表面，漆成白色或灰色以利于解剖组织及酚红显示pH的观察。

无菌操作间的空气消毒：紫外线灯—-产生臭氧，并且室内温度及湿度均较高，不利于工作人员健康。

空气过滤的恒温恒湿装置—-。

洁净室(区)空气洁净度级别表洁净度级别：

尘粒zui大允许数/立方米 100级 3,500 0 5 110000级

微生物zui大允许数 350,000 2,000 100 3100000级

浮游菌/立方米 3,500,000 20,000 50010300000级

沉降菌/皿 10,350,000 60,000 - 15

无臭氧紫外线消毒器电子消毒灭菌器—-在高压电场作用下，电子管的内外电极发生强烈电子轰击，使空气电离而将空气中的氧转换成臭氧。臭氧是一种强氧化剂，能同细菌的胞膜及酶蛋白氢硫基进行氧化分解反应，从而靠臭氧气体弥漫性扩散达到杀菌之目的，消毒时没有死角。消毒后空间的残留臭氧只需30～40min即能自行还原成氧气，空气不留异味，消毒物体表面不留残毒。

2、净化工作台

操作简单，安装方便，占用空间小且净化效果很好。

一般细菌培养室使用的净化工作台主要有两种：

a)侧流式或称垂直式

b)外流式或称水平层流式。

净化工作台工作原理大致相同，通常是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经空气过滤器精滤，由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区，从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。

侧流式工作台：空气净化后的气流由左或右侧通过工作台面流向对侧，也有从上向下或从下向上流向对侧，形成气流屏障保持工作区无菌。工作台结构为封闭式。

外流式(水平式)工作台：净化后的空气面向操作者流动，因而外方气流不致混入操作，但进行有害物质实验操作则对操作者不利。